GRP75经由Raf/Mek/Erk1/2信号转导通路抑制缺糖诱导的细胞凋亡

本文旨在探讨促存活信号通路Raf/Mek/Erk1/2是否参与了葡萄糖调节蛋白75 (glucose-regulated protein 75, GRP75)对缺糖诱导的细胞凋亡的抑制作用。GRP75过表达的PC12细胞给予Raf/Mek/Erk1/2通路抑制剂U0126预处理之后，无糖培养6、12和24 h，同时以DMSO预处理的GRP75过表达PC12细胞组为对照。Western blot检测Erk1/2的磷酸化和表达水平，MTT实验检测细胞存活率，Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核的形态学改变，流式细胞仪检测细胞亚二倍体峰，免疫荧光检测细胞色素c (cytochrome c, Cyt c)向胞浆的弥散情况。结果显示：U0126在没有影响Erk1/2表达水平的前提下，阻断了GRP75对Erk1/2磷酸化水平的维持；U0126处理组的凋亡率明显高于对照组；U0126处理组Cyt c从线粒体向胞浆释放的时间明显早于对照组，同时Cyt c向胞浆的弥散程度大于对照组。以上结果提示，U0126通过抑制Erk1/2磷酸化，阻断了缺糖状态下GRP75对Cyt c释放和细胞凋亡的抑制作用，这表明GRP75是通过Raf/Mek/Erk1/2级联反应抑制缺糖诱导的线粒体凋亡途径的进程。