APA微囊微环境影响胚胎干细胞增殖分化的体外研究

以小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell, ESC)为模型，在生理条件下对ESC进行微囊化包封、培养，并利用免疫组织化学技术及RT--PCR方法检测其生长及未分化状态，以期建立微囊化ESC这一体外培养模型，同时明确海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate--poly--lysine--alginate，APA)微囊微环境对ESC增殖及分化潜能的影响。结果表明：ESC能够在微囊(包括液化型及非液化型)或微球(海藻酸钙胶珠)内生长良好，但因生长环境存在差异，其表现的生长行为各具特征。比较其它类型，ESC在液化型APA微囊内的存活期限最长。经体外维持培养3周以上，仍能持续表达胚胎源未分化干细胞的标志性蛋白AP，SSEA--1及转录因子{sl Oct--4}。为进一步明确微囊内增殖的ESC是否仍具有多向分化的干细胞潜能，应用机械破囊法释放微囊内ESC团，并在体外进行定向诱导。经过近3周的条件诱导，其结果为：细胞团DTZ染色阳性；anti--insulin免疫荧光检测阳性；且特异性表达{sl Pdx--1}，{sl Ins--1}基因。上述结果证明：APA微囊为ESC维持未分化状态的增殖提供了特殊的微环境，APA微囊内所形成的ESC团仍具有多向分化的干细胞潜能。