人卵透明带蛋白ZP3a和ZP3b肽段的免疫原性及其抗血清体外抑制人精子--半透明带结合

分析大肠杆菌表达的重组人卵透明带--3(r--huZP3)蛋白两个肽段(r--huZP3a~(22---176)及r--huZP3b~(177---348))的免疫原性，比较两者抗血清体外抑制人精子-半透明带结合的能力。以制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯化的大肠杆菌表达蛋白为抗原，主动免疫新西兰兔产生抗r--huZP3a~(22---176)及huZP3b~(177---348)抗血清；通过ELISA测定比较两者的抗体应答水平；以蛋白印迹和免疫组化方法测定两者抗血清同重组表达蛋白、天然人卵ZP以及卵巢组织的反应性；通过竞争性半透明带结合试验(hemizona assay, HZA)观察两者抗血清体外抑制人精子-ZP结合能力。 结果显示：未与大分子蛋白载体耦联的r--huZP3a~(22---176)和r--huZP3b~(177---348)抗原都在免疫兔中产生了较高的抗体滴度，而且它们的抗血清可识别大肠杆菌表达的各自重组ZP3肽以及人卵细胞表面天然ZP，两者抗血清也都能在体外抑制人精子--ZP结合。由此可见，r--huZP3a~(22---176)及r--huZP3b~(177---348)蛋白具有良好免疫原性，所产生抗血清也都显示出细胞和组织特异性。因此，单一或合并两个huZP3肽段均可作为抗原研制检 测不明原因性不孕妇女中是否存在抗自身ZP抗体的诊断试剂盒，另外它们的抗血清也能用于鉴定已知huZP3表位肽段的最小B--细胞表位基序。