六味地黄慢性处理对抗D半乳糖引起的大鼠大脑胆碱能神经系统损伤

本研究旨在观察六味地黄(Liu Wei Dihuang, LWDH)对D-半乳糖(D-galactose, D-gal)致衰老大鼠的学习记忆能力及中枢胆碱能神经系统的保护作用。采用成年Sprague-Dawley (SD)大鼠64只，雌雄各半。雄性、雌性大鼠均随机分为4组(n = 8)：空白对照组即生理盐水 + 生理盐水(N + N)组；对照组即生理盐水 + LWDH (N + L)组；模型组即D-gal + 生理盐水(D + N)组和治疗组即D-gal + LWDH (D + L)组。D + N组和D + L组连续每天项部皮下注射D-gal (100 mg/kg) 6周，N + N和N + L组大鼠注射相同体积生理盐水。第三周起给D + L和N + L组大鼠连续每天LWDH汤剂灌胃6周，同时给N + N组和D + N组连续每天相同体积生理盐水灌胃6周。D-gal衰老大鼠造模结束后，采用Morris水迷宫测定大鼠学习、记忆能力，用HE染色法观察海马和视皮质的形态学变化，检测视皮质中乙酰胆碱(acetylcholine, ACh)含量，以及胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase, ChAT)及乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE)的活性，用免疫组织化学方法观察视皮质中胆碱能神经元ChAT、AChE的表达。结果显示：与N + N组相比，D + N组表现出明显的学习记忆能力下降，提示D-gal衰老模型建立成功；D + L组逃避潜伏期显著缩短，游泳速度明显增加，同时其对靶象限搜寻时间百分比和平台穿越次数均显著增加，提示LWDH显著改善了D-gal诱导的学习记忆障碍。LWDH显著地增加了D + L组的视皮质匀浆ACh含量和ChAT活性，而降低了AChE活性。免疫组织化学结果显示：D + L组视皮质神经元AChE和ChAT均明显高于D + N组。HE染色结果显示：与N + N组相比，D + N组海马和视皮质神经元凋亡增加，细胞密度明显下降，而LWDH显著地增加了D + L组神经元密度。LWDH对衰老雌、雄大鼠的神经保护作用存在差异，D + N组雄性大鼠平台穿越次数的改善情况优于雌性大鼠，而雌性大鼠在ChAT表达水平和视皮质神经元密度指标上的改善情况则优于雄性大鼠。以上结果表明，LWDH显著逆转了D-gal诱导的学习记忆能力障碍及海马和视皮质的神经元损伤，其保护的机制可能是通过恢复视皮质中ACh的含量及ChAT活性，提高视皮质中ChAT及AChE的表达而起作用。此外，LWDH对大鼠大脑的保护作用有性别差异。