差速贴壁分离法：获得小鼠骨髓内皮祖细胞诱导分化培养的最佳贴壁时间

本文旨在比较差速贴壁方法分离的不同时间点贴壁的小鼠骨髓单个核细胞诱导分化为内皮祖细胞的生物学特性，探讨最适宜贴壁时间。Ficoll密度梯度离心分离小鼠骨髓单个核细胞，接种于预先铺有纤维连接蛋白的培养板上，定义为1 d贴壁细胞组，取1 d非贴壁细胞再接种为3 d贴壁细胞组，继续培养2 d取非贴壁细胞再接种为3 d非贴壁细胞组，继续培养20 d后，分别检测3组诱导分化内皮祖细胞亚群表面标志、粘附能力和成血管能力。结果显示，1 d贴壁细胞中CD34+、FLK-1+、CD34+/FLK-1+细胞数明显多于3 d贴壁细胞和3 d非贴壁细胞(P < 0.01)；1 d贴壁细胞粘附能力、成血管能力均显著高于3 d贴壁细胞和3 d非贴壁细胞；1 d贴壁细胞和3 d贴壁细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial NO synthase, eNOS)表达量无显著差异，但均显著高于3 d非贴壁细胞(P < 0.01)；3 d贴壁细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达水平显著高于1 d贴壁细胞和3 d非贴壁细胞(P < 0.01)。以上结果提示，小鼠骨髓单个核细胞1 d贴壁诱导分化的内皮祖细胞生物学功能显著高于3 d贴壁细胞和3 d非贴壁细胞；3 d贴壁细胞较1 d贴壁细胞和3 d非贴壁细胞表达较多的VEGF，1 d贴壁细胞和3 d贴壁细胞eNOS表达高于3 d非贴壁细胞。小鼠骨髓内皮祖细胞诱导分化培养最适宜贴壁时间为1~3 d。