小鼠心室肌脱细胞化细胞外基质薄片的制备和评价

心肌细胞外基质(extracellular matrix, ECM)可由心肌经脱细胞处理制得，被广泛认为是一种理想的制备工程心肌的生物支架材料。然而目前的脱细胞方法尚存在不足，本研究拟联合使用经典去垢剂改良脱细胞方法，制备性能更为优良的心肌ECM薄片，以用于构建工程心肌片。用振荡切片机将包埋于低熔点琼脂糖中的成年昆明小白鼠心室肌组织沿心脏横轴切成300 μm厚的薄片，随机分为正常对照组、SDS脱细胞组(0.1% SDS处理)和改良脱细胞组(0.1% SDS和0.5% Triton X-100联合处理)。通过总RNA和总蛋白质含量分析、HE染色和免疫荧光染色等方法评估各组的脱细胞程度和ECM成分保留状态；将改良脱细胞组ECM与小鼠胚胎干细胞源心肌细胞(murine embryonic stem cell-derived cardiomyocytes, mES-CMs)和小鼠胚胎成纤维细胞(murine embryonic fibroblasts, MEFs)共培养以检测其生物相容性。结果显示：SDS脱细胞组和改良脱细胞组ECM中残留的总RNA及蛋白质含量均低于对照组。HE染色结果显示改良脱细胞组核质去除较SDS脱细胞组更彻底。改良脱细胞组可见胶原蛋白IV和层粘连蛋白两种ECM关键成分表达量和分布接近正常心肌组织，而SDS脱细胞组中这两种蛋白明显减少且分布紊乱。mES-CMs和MEFs能存活于改良脱细胞组ECM表面12天以上并向内迁移。综上，SDS和Triton X-100联合脱细胞法制备ECM薄片效果明显，能更好地保留天然ECM成分和结构，具有良好的生物相容性。