15--羟二十碳四烯酸下调肺动脉内皮型一氧化氮合酶的活性

15--羟二十碳四烯酸(15--hydroxyeicosatetraenoic acid，15--HETE)在低氧性肺血管收缩中起着重要作用，低氧肺动脉高压下调内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)，使一氧化氮(nitric oxide，NO)的产量下降，但目前尚无关于15-HETE与eNOS/NO相互作用研究的报道。作者通过Wistar大鼠肺动脉环张力、牛肺动脉内皮细胞NO 产量、总eNOS表达及eNOS磷酸化测定等方法对15--HETE与eNOS/NO的相互作用进行研究。首先分离大鼠肺动脉，分为eNOS抑制剂 L-NAME组(0.1 mmol/L)、去血管内皮组与内皮完整组，用15--HETE作用大鼠离体肺动脉环，测定肺动脉张力。结果表明，L--NAME组、去除内皮组与内皮完整组分别比较，15--HETE对血管的收缩作用增强，且都有统计学意义({sl P}<0.05)。培养牛肺动脉内皮细胞，分别用15--HETE、15--脂氧酶(15--lipoxygenase，15--LO)抑制剂[(cinnamyl 3,4--dihydroxy--[alpha]--cyanocinnamate，CDC)和(nordihydroguiairetic acid，NDGA)]处理细胞，通过Greiss方法检测亚硝酸盐含量，间接测定NO产量，与对照组比较，1 mmol/L 15-HETE明显降低肺动脉内皮细胞NO水平({sl P}< 0.05 )，10 #mu#mol/L CDC和0.1 mmol/L NDGA显著增加NO水平(分别是{sl P}<0.05, {sl P}<0.01); 通过Western blot检测不同时间(5，10，15，20，30，60 min) eNOS的表达情况，结果显示，15--HETE的不同作用时间，没有引起eNOS表达的明显不同；用苏氨酸495位点磷酸化eNOS (Thr495)抗体进行免疫沉淀，再用总eNOS抗体和15--LO抗体通过Western blot检测磷酸化型含量，间接测定eNOS活性，结果表明15-HETE增强Thr495磷酸化型eNOS含量。由于Thr495为eNOS抑制性磷酸化位点，因此15-HETE降低eNOS活性。这些数据表明：15--HETE的缩血管作用有eNOS/NO参与，15--HETE可以通过磷酸化Thr495位点降低eNOS活性，并且首次发现磷酸化eNOS (Thr495)和15--LO之间存在蛋白质相互作用。