TRPC6介导肺动脉高压大鼠肺动脉张力和肺动脉平滑肌细胞Ca2+ 浓度的升高

经典瞬时感受器电位通道6 (transient receptor potential channel 6, TRPC6)蛋白是受体操纵性Ca2+ 通道(ROCC)的分子基础。本文旨在研究TRPC6/ROCC 在野百合碱(monocrotaline, MCT)诱发的肺动脉高压大鼠模型中的作用。Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(CON 组)和MCT 组，CON 组正常饲养三周，而MCT 组按60 mg/kg 剂量一次性腹腔注射2% MCT，建立MCT 诱导的慢性肺动脉高压大鼠模型。通过测定右心室收缩压(RVSP)和右心室重量指数(RVMI)、HE 染色观察肺动脉血管形态，分析肺动脉结构重建。半定量RT-PCR 和Western blot 检测大鼠肺动脉TRPC6 mRNA 和蛋白表达水平。血管张力实验中用可特异性激活ROCC、可透膜的DAG 拟似物1-oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol (OAG)检测大鼠离体肺动脉环的收缩效应。用荧光探针Fluo3-AM 测定OAG 诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)胞浆游离Ca2+ 浓度([Ca2+]i)。结果显示，与CON 组相比，MCT 组的RVSP、RVMI 均明显增高(P<0.01) ；形态学观察可见肺小动脉平滑肌层明显增厚，管腔减小；TRPC6 的mRNA 和蛋白质表达无明显变化。在CON 组，OAG 几乎不引起肺动脉环收缩，而在MCT 组，肺动脉环的收缩反应显著增强，差别有显著性意义(P<0.01)。相比较于CON 组，MCT 也可使OAG 触发的PASMCs[Ca2+]i 增量值显著升高(P<0.05)。上述结果提示，MCT 预处理对肺动脉TRPC6 mRNA 和蛋白质水平的表达无显著增强效应，但可促进TRPC6/ROCC 介导的PASMCs Ca2+ 内流和肺动脉张力升高，诱导大鼠产生肺动脉高压，并进一步诱发肺血管及右心室重构。