应用旋转生物反应器批量制备拟胚体的研究

以小鼠胚胎干细胞(ES-D3)为模型，应用新型细胞培养系统 ——STLV型旋转生物反应器(rotary cell culture system,RCCS)建立一种批量制备拟胚体(embryoid bodies, EBs)的新方法，研究不同细胞接种密度及培养时间对RCCS内EBs产生效 率的影响。为了进一步研究该制备方法是否对EBs的分化潜能产生影响，对照传统方法制备的EBs，利用形态学及RT- PCR方法测定经旋转生物反应器制备的EBs在自发性或诱导条件下(1% DMSO)向心肌细胞的分化能力。结果表明：ES-D3 在RCCS内能够高效形成EBs，与传统的直接悬浮法比较，其EBs的形成效率可达到后者的2倍。1 ×104个/ml为最佳细胞接种密度，培养时间也是在RCCS制备EBs过程中的重要因素之一，培养第4~5天为最佳收获EBs的时间。与悬滴法制备 的EBs比较，该方法制备的EBs分化为心肌细胞的潜能未改变。由此，应用旋转生物反应器可以高效制备EBs，该方法 制备的EBs可以用于发育生物学等基础及应用领域的相关研究。