核受体相关因子1表达下调对多巴胺能细胞酪氨酸羟化酶和神经突起生长的影响

将合成的核受体相关因子1 (nuclear receptor--related factor 1, Nurr1)特异性短发夹寡核苷酸(small--hairpin RNA, shRNA)序列插入真核表达载体pSilenCircle (pSC)，构建{sl Nurr1}基因特异性shRNA真核表达载体，转染体外培养多巴胺能神经前体细胞系MN9D，分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测其对MN9D细胞内源{sl Nurr1}的干扰作用及其对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)表达的影响，并在倒置显微镜下观察MN9D细胞神经突起生长的情况，探讨{sl Nurr1} shRNA表达载体对多巴胺能细胞表型标记物{sl TH}和以神经突起延长为特征的细胞成熟的影响。结果表明，脂质体组细胞和转染阴性对照质粒的MN9D细胞内{sl Nurr1、TH}的表达正常，而转染{sl Nurr1} shRNA真核表达载体(pSC--N1和pSC--N2)的MN9D细胞内{sl Nurr1}和{sl TH}的mRNA水平明显降低，{sl Nurr1} mRNA的下降率分别为62.3%和45.6%，{sl TH} mRNA的下降率分别为76.3%和62.6%。同时Nurr1和TH蛋白的表达亦明显下调，Nurr1蛋白的下降率分别为57.4%和72.0%，TH蛋白的下降率分别为79.1%和70.1%。另外，转染{sl Nurr1} shRNA真核表达质粒的MN9D细胞神经突起延长有所减少，但是与正常细胞无明显差异。结果提示：{sl Nurr1} shRNA真核表达载体能显著下调MN9D细胞内源{sl Nurr1}和{sl TH} mRNA和蛋白的表达，同时可能对MN9D细胞的神经突起延长有一定的抑制作用。{sl Nurr1} shRNA表达载体的成功构建为多巴胺能神经元发育以及帕金森病相关基因的功能研究奠定了基础。