E1A激活基因阻遏子过表达抑制体外人血管平滑肌细胞凋亡

为探讨E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A--stimulated genes, CREG)对人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)凋亡的影响及调控机制，应用正、反义重组逆转录病毒表达载体pLNCX_(2)(+)/CREG及pLXSN(--)/CREG制备稳定感染人胸廓内动脉平滑肌细胞克隆株(human internal thoracic artery--Shenyang, HITASY)细胞模型，观察CREG蛋白过表达及表达抑制对平滑肌细胞凋亡的影响。荧光显微镜下观察DAPI染色后凋亡细胞核形态，Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率，RT--PCR技术分析凋亡相关基因{sl caspase--9} mRNA的表达，蛋白质印迹法分析p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen--activated protein kinase, p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK (phosphorylated p38 mitogen--activated protein kinase, p--p38 MAPK)的表达变化。研究结果显示，CREG蛋白过表达明显抑制血清饥饿诱导的HITASY细胞凋亡的发生；同时细胞中p38 MAPK、p--p38 MAPK的表达增加。相反，抑制CREG蛋白表达则引起正常血清培养状态下VSMCs的自发凋亡明显增加，同时细胞内p38 MAPK、p--p38 MAPK表达显著下降。进一步研究发现，预先应用特异性抑制剂SB203580阻断p38 MAPK信号转导通路后，CREG蛋白过表达引起的细胞凋亡抑制作用被明显减弱，血清饥饿后CREG蛋白过表达引起的HITASY细胞凋亡现象明显增加。上述结果提示，CREG蛋白过表达可以抑制体外培养的VSMCs凋亡，p38 MAPK信号转导通路可能介导CREG蛋白对VSMCs凋亡的抑制作用。