密度梯度离心法同时分离新生大鼠原代心肌细胞与成纤维细胞

本文旨在探讨一种改良的同时分离新生大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞的方法，以建立良好的原代心肌细胞及成纤维细胞研究模型。无菌状态下取Wistar乳鼠(出生不超过2天)心室，用II型胶原酶消化，控制消化时间及次数、搅拌速度、离心次数和速度等，结合Percoll密度梯度离心法分离心肌细胞及成纤维细胞，进行体外培养，观察细胞形态，继而用0.2%台盼蓝染色检测细胞存活率，免疫荧光染色法检测心肌肌钙蛋白I (cardiac troponin I, cTnI)、波形蛋白(Vimentin)及α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)的表达，分别用于鉴定心肌细胞和成纤维细胞纯度。结果显示，本方法5次分离的心肌细胞平均存活率达92%，纯度达95%以上，细胞生长状态良好，可见贴壁自发搏动；成纤维细胞平均存活率达96%，纯度达94%。本方法能同时获得新生大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞，具有很高的产量、存活率及纯度，且操作简便，耗时短，重复性好，是一种较为理想的原代细胞分离、培养方法，可满足各种后续实验要求。