RNA干扰沉默低氧诱导因子--1#alpha#对低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

该研究应用基因克隆技术,将合成的发卡样特异性低氧诱导因子--1#alpha#(hypoxia inducible factor--1alpha,HIF--1#alpha#)干扰寡核苷酸(siRNA)序列插入真核表达载体中,构建出特异性HIF--1#alpha#基因RNA干扰(RNAi)真核表达载体。采用组织块种植法,原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs),将构建出的特异性HIF--1#alpha#RNAi真核表达载体转染到PASMCs;分别在常氧和低氧下进行细胞培养,采用RT--PCR检测PASMCsHIF--1#alpha#mRNA表达水平,用MTT和流式细胞仪检测细胞增殖水平,探讨低氧条件下HIF--1#alpha#RNAi真核表达载体对PASMCs增殖的影响。结果表明,低氧培养48h后,正常PASMCs和转染了HIF--1#alpha#siRNA阴性表达载体的细胞增殖显著,HIF--1#alpha#mRNA表达水平也显著升高;而转染了HIF--1#alpha#siRNA阳性表达质粒的细胞增殖不显著,HIF--1#alpha#mRNA表达水平较低。结果提示:HIF--1#alpha#RNAi真核表达载体能显著干扰培养的PASMCsHIF--1#alpha#mRNA表达,同时抑制低氧环境下PASMCs的增殖。