酸刺激对大鼠颈动脉体I 型细胞酸敏感离子通道亚型表达的影响

本研究在原代培养大鼠颈动脉体(carotid body, CB) I 型细胞中检测酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels, ASICs) 亚型ASIC1a 和ASIC3 的表达情况，并观察酸刺激对其表达的影响。实验取体重50~100 g Sprague-Dawley 大鼠双侧CB 进 行原代培养，采用免疫荧光技术检测培养细胞有无CB I 型细胞特征性标记物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)的表 达，以鉴定培养细胞的类型。采用免疫荧光双标技术，分别检测ASIC1a 和ASIC3 在TH 阳性细胞中的表达情况。以两种 酸性培养基(pH 值分别为6.8 和6.2)作用CB 细胞24 h，pH7.3 培养基为对照组，采用半定量RT-PCR 技术检测ASIC1a 和 ASIC3 mRNA 表达的变化。免疫荧光鉴定显示，原代培养的细胞93% 以上是TH 表达阳性细胞。免疫荧光双标显示，TH 阳性细胞胞浆同时表达ASIC1a 或ASIC3。RT-PCR 结果显示，ASIC1a mRNA 水平在不同酸刺激下变化不明显；ASIC3 mRNA 水平在pH6.8 组变化不明显，而在pH6.2 组显著低于pH7.3 对照组和pH6.8 组。上述结果提示，在转录水平上， 酸刺激对CB I 型细胞不同亚型酸敏感离子通道的作用是不同的，对ASIC3 具有下调作用，而对ASIC1a 没有明显的调控作用。