脂联素对乳鼠心肌细胞缺氧/ 复氧损伤的保护作用

本研究通过在大鼠乳鼠心室肌细胞上建立缺氧/ 复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)模型，模拟在体心肌缺血/ 再灌注损伤，观察脂联素(adiponectin, APN)对心肌细胞H/R 损伤的影响，并探讨其作用机制。采用胰蛋白酶消化法原代培养乳鼠心室肌细胞，α- 肌动蛋白免疫荧光法进行鉴定。选用培养72 h 的单层心肌细胞进行实验，随机分为5 组：对照组、单纯H/R 组、H/R+APN 组、H/R+APN+ 腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)特异性抑制剂阿糖胞苷(AraA)组、H/R+AraA 组。观察各组心肌细胞形态及自发搏动频率，用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡情况，并测定细胞丙二醛(MDA)含量及培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性，激光共聚焦显微镜观察心肌细胞内钙荧光强度，Western blot 检测各组心肌细胞AMPK 磷酸化水平。结果显示，与对照组相比，单纯H/R 组细胞生长状态较差，搏动频率减慢甚至消失，DNA 电泳呈凋亡特征性的梯状条带，细胞凋亡率显著增加，胞浆MDA 水平增高，上清液中SOD活性下降，胞内钙荧光强度明显增高，AMPK 磷酸化水平升高(P<0.05)。与H/R 组细胞相比，APN 预处理后再进行H/R的心肌细胞搏动频率较快，凋亡率明显减少，MDA 水平明显下降，SOD 活性明显升高，心肌细胞AMPK 磷酸化水平明显增高(P<0.05)。AraA 可以阻断APN 的上述保护作用。以上结果表明，APN 可减轻H/R 导致的心肌细胞凋亡，减轻脂质过氧化及细胞内钙超载，这一保护作用可能与AMPK 途径激活有关。