氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞内质网应激及CD36的可能作用

本文旨在研究在鼠源巨噬细胞泡沫化过程中氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)对巨噬细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)的诱导作用及其机制。体外培养RAW264.7 巨噬细胞，分别给予ox-LDL (25、50 和100 mg/L)、抗CD36 抗体+ox-LDL 和衣霉素(tunicamycin, TM)等不同处理。采用油红O 染色观察细胞内脂质蓄积情况，酶比色法测定细胞内总胆固醇含量，免疫细胞化学法检测ERS 标志分子糖调节蛋白94 (glucose-regulated protein 94,GRP94)表达，免疫印迹法检测GRP94 及未折叠蛋白反应关键分子p-IRE1 (phosphorylated inositol-requiring enzyme 1)和X盒结合蛋白1 (X box binding protein 1, XBP1)蛋白表达水平。结果显示，不同浓度(25、50 和100 mg/L) ox-LDL 处理细胞24 h后，胞浆内可见大量油红O 染色阳性脂质颗粒，细胞内总胆固醇含量明显增加，分别为空白对照组的2.1 倍、2.8 倍和3.1倍；使用抗CD36 抗体阻断ox-LDL 的摄入，可显著减少100 mg/L ox-LDL 所致的细胞内胆固醇蓄积。不同浓度ox-LDL 和ERS 诱导剂TM 均可显著增加GRP94 及其上游信号分子p-IRE1 和XBP1 蛋白表达，且表达强度随着ox-LDL 诱导浓度的增加而增强；抗CD36 抗体显著抑制100 mg/L ox-LDL 所致的上述3 种蛋白表达上调。上述结果提示，ox-LDL 可呈剂量依赖性诱导RAW264.7 巨噬细胞产生ERS，激活未折叠蛋白反应信号通路；该过程可能由清道夫受体CD36 所介导。