SHIP 基因诱导白血病细胞株K562 凋亡及其机制

肌醇5’ 磷酸酶(src homology 2 domain-containing inositol-5-phosphatase, SHIP)是继PTEN 之后发现的又一肌醇磷酸 酶，对造血细胞增殖有关键负调控作用。目前国内外对SHIP 基因与人类肿瘤抑制关系方面的研究报道较少。本研究利用 携带野生型SHIP 基因的慢病毒表达载体稳定感染K562 细胞，应用实时荧光PCR、Western blot 检测转染前后细胞内SHIP 基因mRNA 和蛋白水平的变化，MTT 测定细胞增殖水平的变化，ELISA 检测相关激酶活性，TUNEL、Hoechst 33342 检 测细胞凋亡的变化，从而探讨SHIP 基因诱导K562 凋亡的机制，分析SHIP 基因在白血病发病中的意义。结果如下： (1) K562 细胞SHIP 蛋白表达阴性；(2)携带野生型SHIP 基因的慢病毒表达载体转染使K562 细胞表达SHIP mRNA 和蛋白； (3)与对照组相比，转染野生型SHIP 基因导致K562 细胞生长受抑，并出现明显的凋亡征象；(4)转染SHIP 基因的K562 细 胞Akt 磷酸化水平降低；NF-κB 和bcl-xL 表达降低；同时细胞促凋亡基因bad、p27 表达和caspase-9、caspase-3 活性明显 增高。上述结果提示SHIP 通过抑制PI3K/Akt 路径中Akt 的磷酸化，促进其下游bad、p27 表达和caspase-9、caspase-3 的 活化，抑制bcl-xL，最终诱导白血病细胞凋亡；另外，NF-κB 表达下调也是SHIP 抑制白血病细胞增殖并促进细胞凋亡的 重要作用机制。