人源性长寿保障基因2 通过与V-ATPase 作用抑制肝癌细胞的生长

人源性长寿保障基因2 (Homo sapiens longevity assurance homologue 2, LASS2)是本实验室克隆到的一个与酵母长寿保障基因LAG1 高度同源的人类新基因。前期研究显示，LASS2 可与V-ATPase 质子泵的c 亚基ATP6L 结合，过表达LASS2可以抑制肝癌细胞SMMC-7721 的生长。本研究旨在探讨LASS2 对V-ATPase 质子泵功能的调节是否参与LASS2 对肝癌细胞生长的抑制作用。使用本室构建、保存的pCMV-HA2-LASS2 质粒瞬时转染肝癌细胞(HCCLM3)，而未转染质粒的HCCLM3 细胞作为空白对照，运用CCK-8 试剂盒检测细胞生长情况；采用BCECF-AM 和BCECF 氢离子敏感探针分别测定细胞内、外H+ 浓度；应用流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot 检测线粒体和胞质内细胞色素c (cytochrome c, Cytc)、胞质中的无活性pro-caspase-3 的表达情况。结果显示，外源性LASS2 的过表达对HCCLM3 细胞生长有抑制作用；过表达LASS2 使HCCLM3 细胞内H+ 浓度上升，细胞凋亡率提高，线粒体Cyt c 释放增加，胞质中pro-caspase-3 含量下降。以上结果提示提示LASS2 可能通过调控V-ATPase 质子泵的功能，提高细胞内H+ 浓度，从而激活细胞线粒体凋亡途径、抑制肝癌细胞的生长。