黄芪诱导人羊膜上皮细胞WISH细胞株向神经细胞分化并抑制Notch1表达及促进细胞存活

本研究旨在探讨黄芪(astragalus)对人羊膜上皮细胞WISH细胞株向神经细胞分化、Notch1基因表达和细胞活力的影响。将人羊膜上皮细胞WISH细胞株分为3组，即黄芪诱导组(设立4个浓度亚组)、全反式维甲酸(alltransretinoic acid, RA)组和对照组。分别采用化学诱导剂RA和黄芪注射液诱导WISH细胞株分化为神经细胞，在诱导前后，应用免疫细胞化学方法染色鉴定神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)、微管相关蛋白2 (microtubule associated protein 2, MAP-2)、神经干细胞巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进一步鉴定细胞多能性基因Oct4、Notch1、Hes1、神经干细胞标记物Nestin基因和神经元标记物NSE，四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞活力。倒置显微镜观察显示，WISH细胞株分别经RA诱导12 h后、黄芪诱导24 h后，由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起，且有分支。诱导48 h时，100 μL/mL黄芪诱导组NSE和MAP-2阳性率低于RA诱导组(P < 0.05)，细胞活力较RA组高(P < 0.05)，两诱导组NSE、MAP-2和GFAP阳性率均高于对照组；而黄芪诱导组Nestin和GFAP阳性率高于RA组(P < 0.05)，两诱导组Nestin阳性率均低于对照组。同时RT-PCR检测到黄芪(100 mL/mL)和RA诱导后多能基因Oct4、Notch1、Hes1表达低于对照组，而NSE表达增多。以上结果提示，黄芪和RA都可诱导WISH细胞株在体外分化为神经元样细胞，且黄芪于100 μL/mL浓度时效果较好，黄芪诱导对细胞毒性较小，诱导过程中能抑制Notch1信号分子的表达