RNA结合蛋白HuR通过其RNA识别模体调节hsa-let-7c表达

微小RNA (microRNAs, miRNA)是一种短链的非编码RNA，它通过抑制RNA的翻译或促进RNA的降解调控多种细胞活动和机体的发育。机体主要通过转录和转录后两个层面对miRNA的表达进行调控，其中对miRNA转录水平的调控决定了miRNA表达的特异性，而目前我们对其转录后调控的机制还知之甚少。本研究旨在证实RNA结合蛋白HuR是否通过与pri-miRNA中富含AU的序列相结合调节miRNA的表达。利用生物信息学方法对pri-miRNA中的AUUUA模体进行筛查，发现在hsa-let-7c下游富含AUUUA模体，而hsa-miR-21则不具备这一模体。通过转染HuR质粒到HEK293T细胞构建过表达模型，然后用Western blot和real-time PCR分别检测HuR蛋白和miRNAs表达水平。结果显示，过表达HuR能够促进成熟hsa-let-7c而非hsa-miR-21表达。而过表达缺失RNA识别模体3 (RNA recognition motif, RRM3)的突变体HuR则不能促进hsa-let-7c的表达。以上结果提示RRM3是HuR介导成熟hsa-let-7c表达的关键序列，而HuR在调控miRNA生物合成中可能扮演了一种新的角色，即在转录后水平调节miRNA的表达