毛钩藤碱通过线粒体途径诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

本研究旨在观察毛钩藤碱对人乳腺癌细胞的抑制作用，并探讨其分子机制。选取人正常乳腺上皮MCF-10A细胞、乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞作为研究对象，采用CCK-8法检测细胞活性，采用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)，采用Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3以及胞浆中细胞色素C (cytochrome C, Cyt C)的蛋白水平。结果显示，毛钩藤碱可显著降低MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞存活率，且该作用呈时间和剂量依赖性(P < 0.05)；毛钩藤碱作用MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞48 h的IC50分别为447.79和179.06 μmol/L；毛钩藤碱可诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡和MMP去极化(P < 0.05)，促进线粒体释放Cyt C (P < 0.05)，激活caspase 9和caspase 3 (P < 0.05)，这些作用均可被线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore, MPTP)特异性阻断剂环孢素A (cyclosporin A, CsA)显著抑制(P < 0.05)；此外，毛钩藤碱显著下调MDA-MB-231细胞Bcl-2蛋白水平并上调Bax蛋白水平(P < 0.05)。以上结果提示，毛钩藤碱可诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡，这可能与其调低Bcl-2/Bax蛋白比值，从而引起MPTP持续开放和Cyt C释放，最终导致caspase 9和caspase 3活化有关