过表达miR-498通过下调STAT3抑制类风湿性关节炎患者Th17细胞分化

本文旨在探讨微小RNA-498 (miR-498)影响类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中Th17细胞分化的作用机制。从50例RA患者和50例对照人群中分别收集外周血，分离PBMCs。流式细胞术检测CD4+IL-17+ T (Th17)细胞或者CD4+ FOXP3+ T (Treg)细胞比例，并分析Th17/Treg比值。Real-time PCR检测细胞中miR-498和STAT3基因表达，Western blot检测STAT3的蛋白表达，ELISA检测外周血血清或细胞上清中IL-17的浓度。荧光素酶报告基因实验验证miR-498靶向结合STAT3的3’非翻译(3’untranslated region, 3’UTR)。miR-498 mimic或/和pcDNA-STAT3瞬时转染CD4+ T细胞，进一步考察miR-498影响Th17细胞分化的机制。结果显示，RA患者的PBMCs中，Th17细胞比例显著高于对照，且Th17/Treg比值也显著高于对照(P < 0.05)。miR-498低表达而STAT3高表达于RA患者的PBMCs中，且RA患者血清中的IL-17浓度显著高于对照(P < 0.05)。在转染野生型STAT3报告基因质粒的细胞中转染miR-498 mimic/inhibitor后，荧光酶活性、STAT3的基因和蛋白表达均明显改变(P < 0.05)，但是在转染突变型STAT3报告基因质粒的细胞中转染miR-498 mimic/inhibitor，上述指标没有显著变化(P > 0.05)。此外，miR-498 mimic转染CD4+ T细胞后，显著降低Th17细胞比例，且细胞分泌IL-17的水平减少(P < 0.05)，而与pcDNA-STAT3共转CD4+ T细胞后，Th17细胞比例明显提高，细胞分泌IL-17的水平增加(P < 0.05)。以上结果提示，在RA患者CD4+ T细胞中，过表达miR-498靶向下调STAT3，进而抑制Th17细胞分化