重组人胰岛素的体外复性纯化

对大肠杆菌表达的重组人胰岛素原包涵体蛋白的变性复性条件进行了优化。考察了变性液中DTT的浓度，复性液的pH值，还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的物质的量比，甘氨酸(Gly)浓度对复性的影响。结果表明，在变性液中加入60mmol/L DTT，复性液pH9.5，GSH与GSSG物质的量比为5∶1，Gly浓度为50mmol/L条件下复性率最高。复性后的重组人胰岛素原过DEAE-Sepharose FF柱，经过TPCK-胰蛋白酶和羧肽酶B酶切后，再过Sephadex G-25柱，得到纯度较高的重组人胰岛素。目的蛋白收率为96mg/g干菌体。