丙烯酰CoA合成酶在大肠杆菌中的表达及其酶活性表征

以橙色绿屈挠菌（Chloroflexus aurantiacus）dsm636基因组DNA为模板，应用PCR技术扩增并克隆了丙烯酰CoA合成酶（ACS）基因，并连接到表达载体pET-22b(+)质粒上，构建了pET-22b(+)-Acs重组质粒，测序结果100%正确。将重组质粒pET-22b(+)Acs转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中，通过氨苄霉素抗性平板筛选，构建了大肠杆菌BL21(DE3)-pET-22b(+)-Acs基因工程菌。重组菌株经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达，SDS-PAGE电泳分析，目标条带出现在分子量约160000处，表明丙烯酰CoA合成酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达；体外酶活实验证明，所表达的丙烯酰CoA合成酶是具有活性的。