三种不同磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆、表达及其对宿主菌生长的影响

应用PCR技术分别克隆了集胞藻6803、鲍曼不动杆菌和大肠杆菌的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）基因，构建重组大肠杆菌。SDS-PAGE凝胶电泳结果显示，来自集胞藻6803和大肠杆菌的PEPC实现了高效表达，而来自鲍曼不动杆菌的PEPC表达较弱，提示密码子偏好性的影响。前两菌提前进入对数生长期，来自鲍曼不动杆菌PEPC工程菌却延迟生长，但这3种重组菌发酵24h后的生物量与对照菌几乎相同。如果排除质粒复制造成的代谢负荷，过表达PEPC促进了宿主菌的生长，推测是因为重排了代谢流量。