miR-130b在胶质瘤对替莫唑胺耐药中的作用

摘要 目的：探讨微小RNA-130b（microRNA-130b，miR-130b）在胶质瘤细胞中的表达及其调控体外胶质瘤细胞对替莫唑胺（temozolomide，TMZ）耐药中的作用。方法：利用RT-qPCR法检测miR-130b在胶质瘤细胞株U251、SHG-44和U87中的表达水平；计算TMZ对不同胶质瘤细胞株（U251、SHG-44和U87）的半数抑制浓度（IC50）；通过不同浓度梯度的TMZ作用于体外U251细胞，从而获得相对稳定的对TMZ耐药的U251（U251/TMZ resistance，U251/TR）细胞，计算TMZ对U251/TR细胞的IC50及耐药指数（resistance factor，RF）；使用miR-130b模拟物（miR-130b mimics）和miR-130b抑制物（miR-130b inhibitor）瞬时转染体外胶质瘤细胞；CCK-8法检测体外胶质瘤细胞的活力；流式细胞术检测胶质瘤细胞凋亡；通过生物信息学工具分析miR-130b可能的靶基因，萤光素酶报告基因实验测定萤光素酶活性；电泳迁移率变动分析检测核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）的活性；Western blot法测定肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、Bcl-2、X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）和survivin蛋白在胶质瘤细胞中的表达水平。结果：TMZ对不同胶质瘤细胞株（U251、SHG-44和U87）的IC50分别为54.8、94.8和149.6 μmol/L；TMZ对U251/TR细胞的IC50为（446.5±61.3）μmol/L，其RF为8.1；转染miR-130b mimics可明显增强TMZ对U251/TR细胞的生长抑制和凋亡诱导作用；转染miR-130b inhibitor可显著抑制TMZ对U251/TR细胞的生长抑制和凋亡诱导作用；萤光素酶报告基因实验验证TNF-α是miR-130b的直接作用靶点；与mimics NC组相比，转染miR-130b mimics后U251/TR细胞中的NF-κB活性及TNF-α、Bcl-2、XIAP和survivin蛋白表达均明显下调；与inhibitor NC组相比，转染miR-130b inhibitor后U251细胞中的NF-κB活性及TNF-α、Bcl-2、XIAP和survivin蛋白表达均显著上调（P<0.05）；NF-κB抑制剂Bay 11-7082可增强TMZ对U251/TR细胞凋亡的诱导作用。结论：miR-130b在耐药型胶质瘤细胞中表达下调，并通过靶向调控TNF-α/NF-κB通路增强TMZ对体外胶质瘤细胞的作用。 服务 把本文推荐给朋友 加入我的书架 加入引用管理器 E-mail Alert RSS 作者相关文章 服务 作者相关文章