基于Endo-M N175Q糖链转移反应与丙酮富集糖肽的LC-MS分析糖蛋白N-糖链

基于化学酶标记和丙酮富集糖肽方法，建立了一种可靠、有效、简单的糖蛋白N-糖链分析方法。以唾液酸糖肽(SGP)为模型糖肽，比较了样品中丙酮加入量对SGP的富集效果，最终选择加入样品体积5倍量的丙酮。用丙酮富集经胰蛋白处理的核糖核酸酶B(RNase B)酶解液中的糖肽，以富集分离得到的糖肽(糖基供体)和PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc(糖基受体)作为酶反应底物，进行Endo-M N175Q的转糖基反应，得到PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc-N-糖链标记物。采用YMC C18色谱柱为分析柱，10 mmol/L甲酸铵-乙腈为流动相梯度洗脱，经液相色谱-串联质谱(LC-MS)检测得到5种高甘露糖型糖链。结果表明，丙酮可有效地富集大量肽和少量糖肽混合溶液中的糖肽，Endo-M N175Q可将天然糖肽的糖链转移到PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc受体上。将该方法应用于胎球蛋白N-糖链分析，检测到5种复杂型N 糖链。该研究为各种糖蛋白N-糖链检测提供了新的分析方法