流动注射-分光光度法测定天然产物对酪氨酸酶活性的影响

建立了一种快速、灵敏且高精度的流动注射-分光光度法用于研究天然产物对酪氨酸酶活性的影响。此方法基于一定介质条件下L-3,4-二羟基苯丙氨酸（L-DOPA）在酪氨酸酶的作用下，发生氧化生成棕褐色多巴醌，其最大吸收峰位于475 nm处，而酪氨酸酶抑制剂能降低酶促反应速度，减少多巴醌形成的量，从而降低475 nm下的吸光度值，形成倒峰。在优化实验条件下，半抑制浓度的曲酸抑制酪氨酸酶活性测定相对标准偏差（n=10）为0.036%，与分光光度法和酶标仪微量法相比，精密度提高了10倍以上。咖啡酸对酪氨酸酶有较强的激活作用，对二酚酶相对激活率达到50%时的浓度（IC50）为0.170 mmol/L；薰衣草花水相提取物具有较强的抑制活性，其IC50值为0.96 mg/mL。与分光光度法及酶标仪微量法相比，流动注射-分光光度法精密度高，重复性好，适用于天然产物对酪氨酸酶活性影响的测定