光谱法与共焦荧光成像法研究罗丹明B与ct-DNA的相互作用

采用吸收光谱、荧光光谱以及共焦荧光成像技术研究生理条件下罗丹明B（Rhodamine B，RB）与小牛胸腺DNA（ct-DNA）的相互作用以及相互作用模式。光谱研究结果显示，在450~650nm的吸收光谱范围内，ct-DNA溶液对罗丹明B有减色作用；在560~660nm荧光发射光谱范围内，ct-DNA对罗丹明B有荧光猝灭作用。同时，随着ct-DNA的加入，罗丹明B溶液的荧光偏振值发生变化，说明罗丹明B与ct-DNA能发生相互作用。在竞争性实验中，罗丹明B未能将亚甲基蓝（MB）从MB-ct-DNA复合体系中置换出来，说明罗丹明B与ct-DNA通过沟槽结合方式发生相互作用。共焦荧光成像结果显示，ct-DNA加入后，罗丹明B的荧光猝灭十分明显。利用罗丹明B和4′,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对HeLa细胞染色后进行共焦荧光成像，结果进一步证实罗丹明B与ct-DNA是通过沟槽结合作用将细胞核染成红色