三相法从苦杏仁中分离制备β-葡萄糖苷酶

三相分离是用盐和有机溶剂将酶或蛋白质从复杂的混合物中沉淀出来的方法。该方法被用于从苦杏仁粗酶提取液中制备β-葡萄糖苷酶，为了提高苦杏仁β-葡萄糖苷酶的纯化程度和酶活回收率，分别研究了有机溶剂种类及浓度、硫酸铵浓度、pH值和温度对三相分离过程的影响。研究结果表明：叔丁醇为最佳有机溶剂，粗提物与叔丁醇的体积比为1.0:1.5（v/v），硫酸铵饱和度为50%（w/v），体系pH值为5.0，最佳温度为25℃。在此优化条件下，苦杏仁β-葡萄糖苷酶的纯化倍数达到5.97，酶活回收率为85.7%。通过SDS-PAGE电泳结果分析，三相分离技术显示出较好的酶蛋白纯化效果，纯化的β-葡萄糖苷酶分子质量为60.0 kDa左右。本研究提供了一种快速、高效从苦杏仁中制备β-葡萄糖苷酶的方法，降低了该酶在有机合成中的成本