检测小鼠肝炎病毒的SNaPshot分型技术及其应用

建立一种能对MHV1、MHV3、JHM、A59 4种常见小鼠肝炎病毒（Murine Hepatitis Virus，MHV）进行分型检测的SNaPshot新方法。根据MHV 4种常见毒株基因序列比对结果，设计内外两对PCR通用引物和4个单碱基延伸引物，提取MHV 4种常见毒株RNA，逆转录后进行PCR扩增，纯化扩增产物，用SNaPshot方法进行单碱基延伸，将产物进行毛细管凝胶电泳，根据电泳结果分析毒株基因型。优化SNaPshot分析条件，进行灵敏度、特异性分析。用ELISA法和SNaPshot方法检测41例小鼠（Mus musculus）血清样本，将阳性样本进行克隆测序检测。当T1 ~ T4引物修饰的poly T的数量分别为0、3、10和15，其浓度比为4︰6︰5︰10，引物大小分别为16 bp、19 bp、26 bp和31 bp时，SNaPhot分型检测MHV cDNA的最低浓度为1.25 mg/L，特异性为100%，与ELISA和T-克隆测序比较，其准确性为100%（41/41），阳性样本均为JHM毒株。实验结果说明，所建立的SNaPshot检测方法能对MHV1、MHV3、JHM、A59进行分型检测，并且具有灵敏、特异、准确的优点