乙型肝炎病毒HBx基因的shRNA重组表达载体的构建和鉴定

目的: 构建 pGenesil-3.1-HBx-shRNA 重组表达载体， 探讨其作用于 HepG2.2.15 细胞的生物活性． 方法: 构建了针对HBx基因的siRNA 表达载体，通过电穿孔法转染 HepG2.2.15 细胞，以荧光显微镜观察细胞的转染效率，QRT-PCR检测细胞中HBx基因的相对表达量，利用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测了细胞增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡．结果: 酶切和测序鉴定证实构建质粒含有HBx基因，QRT-PCR检测和荧光显微镜观察到构建的pGenesil-3.1-HBx-shRNA 可以在 HepG2.2.15 细胞中表达，HBx基因的表达下降了 28%(P＜0.05)，细胞增殖水平下降了47%(P＜0.05)，质粒 pGenesil-3.1-HBx-shRNA 转染后的HepG2.2.15 细胞凋亡率显著升高．结论: 乙型肝炎病毒HBx基因的shRNA重组表达载体构建成功，沉默HBx基因的shRNA能够抑制HBx基因的表达，且对HepG2.2.15细胞的增殖水平起明显的抑制作用