一种新型的构建CRISPR/Cas9 KnockOut载体的方法

利用CRISPR/Cas9系统这一基于细菌核酸酶Cas9的新型基因编辑工具，可以在原核细胞和真核细胞中实现基因敲除的功能．首先使用CRISPR设计工具设计靶点，退火来制备sgRNA双链，用BsmBⅠ酶切割gRNA质粒，构建 LentiCRISPRv2的重组质粒．通过U6启动子上的LKO1.5引物对每个菌落序列进行了测序验证，结果表明利用此新方法可以成功构建 CRISPR/Cas9系统的KnockOut载体