美国白蛾核型多角体病毒ORF72原核表达载体的构建、表达及纯化

[目的]根据Ikdea对HycuNPV全基因组序列的分析，筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因。[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体pGEX-4T-1上，对其进行诱导表达，优化表达的条件，并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。[结果]重组质粒pGEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确，证明重组质粒载体构建成功。通过SDS-PAGE凝胶电泳显示，ORF72蛋白能够与pGEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达，诱导表达后的融合蛋白大小约为38.2 kDa。优化后的表达条件为：异丙基硫代β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导浓度为1.0 mmol？L-1，最佳诱导温度为25℃，最佳诱导时间为4 h，并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达，但在Rosetta菌株中表达量更高。[结论]成功构建了pGEX-4T-1-ORF72原核表达载体，确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件，诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白，为进一步研究其生物功能奠定基础