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湖南农业大学学报(自然科学版) 2016
抗红斑丹毒丝菌的rSpaA蛋白猪源单链抗体库构建及单链抗体淘选Keywords: 猪源抗体库 单链抗体 红斑丹毒丝菌 噬菌体展示技术 Abstract: 从免疫过rSpaA的猪的脾淋巴细胞中提取总RNA，采用RT–PCR技术反转录合成cDNA。设计兼并引物扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段，采用重叠延伸PCR方法，将VH和VL通过Linker连接成重组单链抗体(以下简写为scFv)的基因片段。将scFv的基因连接至噬菌粒载体pComb3Xss，将重组载体电转化至宿主菌XL1?Blue，并经辅助噬菌体M13KO7拯救，获得猪源噬菌体单链抗体库，库容约为2.5×106。以rSpaA为靶抗原，经免疫亲和筛选，获得8株特异性较好的阳性克隆。本研究结果可为制备抗红斑丹毒丝菌的重组scFv提供新途径，并为猪丹毒的免疫检测和综合防制提供材料基础
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