红鳍东方鲀去乙酰化酶SIRT3基因的克隆及原核表达

从红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)肝脏组织中提取总RNA，通过RT–PCR扩增，获得SIRT3基因的编码阅读框(ORF)，用原核表达载体pET32a(+)构建pET32a/SIRT3重组质粒，用异丙基–β–D–硫代半乳糖苷(IPTG)将重组质粒pET32a/STRT3在大肠杆菌Rosetta (DE3)进行诱导表达，并用镍柱纯化融合表达蛋白。结果显示，红鳍东方鲀SIRT3基因(trSIRT3)ORF区大小为1 263 bp大小，编码420个氨基酸。经IPTG诱导表达后，获得1个带组氨酸(His)标签的融合蛋白，目的蛋白主要存在于上清溶液中，为可溶性表达。用镍离子亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，获得了相对分子质量约66 000的重组蛋白