铜绿假单胞菌脂肪酶基因(LipA)在枯草芽孢杆菌pab02中的整合表达

对铜绿假单胞菌脂肪酶基因(LipA)进行克隆，构建整合表达质粒pHSG398–16S–lipA，并在枯草芽孢杆菌 pab02中整合表达。根据铜绿假单胞菌LipA基因设计引物，扩增LipA基因，并进行测序，构建整合表达质粒pHSG398–16S–lipA，转化枯草芽孢杆菌pab02，并对转化后的阳性菌株进行诱导表达。结果显示，成功从铜绿假单胞菌A05菌株中扩增到长1 092 bp 的LipA基因，该基因与铜绿假单胞菌 LipA基因(登录号为AB290342)的同源性高达98%；该基因共编码311个氨基酸(aa)，包含26个aa组成的信号肽和285个aa组成的成熟肽；成功构建了整合表达质粒pHSG398–16S–lipA，并将LipA整合到枯草芽孢杆菌pab02染色体上，获得了重组枯草芽孢杆菌pab02–lipA；SDS–PAGE分析结果表明，脂肪酶蛋白得到了有效表达，该蛋白的相对分子质量约为37 000