锦鲤疱疹病毒潜伏感染实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus，KHV)潜伏感染的方法，以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物，通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法，并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示：建立的方法与鲤痘疱疹病毒、金鱼造血器官坏死病病毒和鳗鲡疱疹病毒均无交叉反应，特异性强；最低检出率为42拷贝/μL，灵敏度高。用本方法对63份临床样品进行检测，有锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病史的18份样品的检测结果全为阳性，阳性率为100%；从有临床症状的鱼中得到的15份样品的检测结果全为阳性，阳性率为100%；30份无任何临床症状鱼中的6份被检测为阳性，阳性率为20%。本试验中建立的水生动物疱疹病毒潜伏感染快速检测方法，可为潜伏感染KHV的临床检测提供一种快速、敏感和特异的检测手段，可为KHVD的分子流行病学调查和预防提供参考