1,5-(OH)2D3通过Ca2+/CaM 信号调控内皮细胞自噬抑制动脉粥样硬化钙化

目的 探讨1,5二羟基维生素D3(1,5-(OH)2D3)是否通过信号调控人脐静脉内皮细胞(HUVEC)自噬抑制细胞钙化及小鼠动脉粥样硬化斑块内钙化。方法 (1)将体外培养的HUVEC高脂刺激自噬后予1,5-(OH)2D3干预后,通过荧光显微镜、透射电镜、蛋白免疫印记(Western blot)检测细胞自噬水平；利用慢病毒过表达或者沉默钙调蛋白(CaM),运用Western blot、茜素红染色法、钙检测试剂盒检测细胞钙化指标骨形态发生蛋白2(BMP-2)、碱性磷酸酶(ALP)。(2)取6～8周龄ApoE－/－雄性小鼠高脂饲养形成动脉粥样硬化模型,1,5-(OH)2D3灌胃后尾静脉注射CaM过表达或者沉默慢病毒,Western blot检测组织自噬及钙化水平指标；扫描电镜观察主动脉斑块自噬小体及钙沉积；HE及Von Kossa染色法分别检测小鼠主动脉粥样硬化及钙化程度。结果 体外实验显示,1,5-(OH)2D3处理后细胞自噬增强,Ca2+与CaM上调；与对照组相比,CaM过表达组自噬增强,细胞钙化减轻,ApoE－/－小鼠斑块内钙化明显被抑制；CaM沉默组细胞自噬流不通畅,细胞钙沉积增加；ApoE－/－小鼠斑块内钙化明显增加(P＜0.01) 。结论 1,5-(OH)2D3通过Ca2+/CaM信号调控HUVEC自噬抑制细胞钙化及小鼠动脉粥样硬化斑块钙化