哈蟆油药材基因组DNA提取方法的比较

目的：建立一种适合于哈蟆油药材基因组DNA的提取方法，为该药材的后续分子鉴定奠定基础。方法：采用十二烷基硫酸钠（SDS）法，改良SDS法，Chelex-100法，异硫酸氰胍（GuSCN）法，试剂盒法及改良试剂盒法提取哈蟆油基因组DNA，利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及细胞色素C氧化酶Ⅰ（COⅠ）序列的引物聚合酶链式反应（PCR）扩增对DNA产量及质量进行检测。结果：Chelex-100法，改良SDS法，GuSCN法及改良试剂盒法均能从哈蟆油药材中提取得到基因组DNA，SDS法和试剂盒法提取不到。其中改良SDS法得到的DNA质量良好，得率高，但操作繁琐；改良试剂盒方法得到的DNA质量较好，但得率低，成本高；Chelex-100法操作简单快速、得率高，但得到的DNA质量较差；GuSCN法提取的DNA含有较多杂质，会抑制PCR反应。结论：Chelex-100法、改良SDS法及改良试剂盒法均可得到满足PCR扩增要求的DNA，实践中可根据条件选择适宜方法来提取哈蟆油基因组DNA