断藤益母汤对破骨细胞RANKL信号通路及MMP-9的影响

目的：探讨断藤益母汤（DTYMD）对破骨细胞（OC）核转录因子-κB （NF-κB）受体活化因子配体（RANKL）信号通路及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响及其骨保护的作用机制。方法：通过诱导RAW264.7巨噬细胞建立体外破骨细胞培养体系；设空白组，模型组，DTYMD （400，600，800，1 000 mg·L-1）组和甲氨蝶呤（2 mg·L-1）组，然后通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色对破骨细胞进行鉴定；细胞增殖检测（CCK-8）各组细胞生存率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测RANKL信号通路关键蛋白表达；酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组细胞MMP-9表达水平的变化。结果： TRAP染色显示，与模型组相比，DTYMD 400，600 mg·L-1组融合细胞数量有所减少，但差异统计学差异；DTYMD 800，1 000 mg·L-1组融合细胞数目显著减少（P<0.01）。CCK-8结果显示，与模型组比较，DTYMD 600，800，1 000 mg·L-1组和甲氨蝶呤2 mg·L-1组生存率明显下降（P<0.05，P<0.01）。Western blot结果显示，与模型组相比，DTYMD 1 000 mg·L-1组、甲氨蝶呤2 mg·L-1组中RANKL蛋白表达有所下降（P<0.05）。DTYMD各组中的OPG蛋白表达水平明显变化。ELISA结果显示，与模型组相比，DTYMD各组及甲氨蝶呤组中的MMP-9表达水平均有所下降，且DTYMD质量浓度越高，下降越明显（P<0.05，P<0.01）。结论：断藤益母汤可能是通过下调RANKL和MMP-9的表达以及抑制破骨细胞的分化和增殖而起到骨保护作用