金复康口服液诱导肺癌细胞A549凋亡的机制

目的：研究金复康口服液（JFK）诱导人非小细胞肺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法：取对数生长期的人非小细胞肺癌细胞A549，随机分为空白组和药物组，采用溴化四甲基偶氮（MTT）比色法，考察不同质量浓度JFK（0.3，1.5，3，7.5，15，30 g ·L-1）对A549细胞体外增殖能力的影响。通过平板克隆形成实验考察JFK对A549细胞平板克隆形成的影响，利用流式细胞仪考察JFK对A549细胞凋亡的影响；蛋白免疫印迹法（Western blot）考察JFK对裂解DNA修复酶（cleaved PARP），活化型半胱天冬酶-3（actived Caspase-3），Wnt/β-联蛋白（β-catenin），细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的蛋白表达及对促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路和蛋白激酶B（Akt）信号通路的影响，实验中设置空白组和药物组，药物组为A549细胞加入15，30 g ·L-1JFK，分别干预24 h，30 min。结果：JFK在1.5~30 g ·L-1呈质量浓度依赖性的抑制A549细胞外增殖（P<0.01）。JFK抑制A549细胞的平板克隆形成在15~30 g · L-1，其中JFK 30 g · L-1时抑制A549细胞的平板克隆最显著（P<0.01）。与空白组比较，JFK 15~30 g · L-1可提高Annexin Ⅴ和PI双阳细胞率，诱导A549细胞凋亡（P<0.05），且呈浓度依赖性提高cleaved PARP和actived Caspase-3的蛋白表达，并抑制β-catenin和cyclinD1在蛋白水平的表达（P<0.05，P<0.01）。JFK上调MAPK信号通路中JNK和p38的蛋白磷酸化水平（P<0.05），同时下调Akt信号通路中Akt在T308和S473的位点磷酸化水平（P<0.05）。结论：金复康口服液抑制人非小细胞肺癌细胞A549的体外增殖、平板克隆的形成并诱导其凋亡，部分通过调控JNK/p38/MAPK信号通路和Akt信号通路，抑制β-catenin和cyclinD1，同时提高凋亡相关蛋白cleaved PARP和actived Caspase-3的表达