左归丸通过线粒体途径抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡

目的：观察左归丸对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的保护效应，探讨其作用机制是否与其干预线粒体途径有关。方法：以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象，制备左归丸含药血清，建立叔丁基过氧化氢（t-BHP）成骨细胞MC3T3-E1氧化应激模型，实验分为空白组，t-BHP组，左归丸+t-BHP组，补佳乐+t-BHP组。孵育24，48，72 h后，采用噻唑蓝（MTT）法检测左归丸含药血清对t-BHP诱导MC3T3-E1细胞存活的影响；孵育48 h后，采用吖啶橙溴乙啶（AO/EB）染色法检测细胞凋亡，采用Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化，采用罗丹明123荧光染色法观察线粒体膜电位的改变，采用蛋白质免疫印迹（Western blot）法分析线粒体蛋白家族B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2），Bcl-2相关X蛋白（Bax），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达水平。结果：与空白组比较，t-BHP组显著抑制细胞增殖（P < 0.05，P < 0.01），细胞凋亡增加，线粒体膜电位降低，Bcl-2蛋白表达明显下调（P<0.01）；与t-BHP组比较，左归丸加t-BHP组促进暴露于t-BHP诱导的MC3T3-E1氧化损伤细胞的存活（P<0.01），48 h者尤佳，逆转细胞凋亡情况，提高细胞线粒体膜电位，上调Bcl-2蛋白表达（P<0.05），抑制Bax和Caspase-3蛋白表达（P<0.01）。结论：左归丸含药血清能够抗t-BHP诱导的MC3T3-E1细胞凋亡，其作用机制可能与其干预线粒体途径有关