板蓝根含药血清对病毒感染RAW264.7细胞的TLR3信号通路的影响

目的：研究板蓝根含药血清对呼吸道合胞病毒（RSV）感染RAW264.7细胞中干扰素-β（IFN-β），Toll样受体3（TLR3），TBK1，干扰素调节因子3（IRF3）表达的影响，阐释其可能的抗RSV机制，为临床使用提供实验依据。方法：本实验分为6组，分别为空白组，RSV感染细胞模型组，板蓝根含药血清低、中、高体积分数组（40%，50%，60%板蓝根含药血清），利巴韦林含药血清组（70%利巴韦林含药血清）。除空白组外，其余各组接种RSV造成病毒感染模型，采用板蓝根含药血清或利巴韦林含药血清进行干预，12 h后收集细胞及其上清液，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞上清液中IFN-β含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测RAW264.7细胞中TLR3，TBK1，IRF3和IFN-β mRNA的表达；蛋白质免疫印迹（Western blot）法检测TLR3，TBK1，IRF3和p-IRF3蛋白的表达。结果： RSV感染RAW264.7细胞12 h后，与空白组比较，模型组TLR3，TBK1和IFN-β mRNA的表达显著升高，IFN-β，TLR3，TBK1和p-IRF3蛋白的表达也显著升高（P<0.01），IRF3 mRNA和蛋白均明显变化；与模型组比较，板蓝根含药血清中、高体积分数组能够显著下调RSV诱导的TLR3，TBK1和IFN-β mRNA的高表达（P < 0.05，P < 0.01），同时明显下调RSV诱导的TLR3，TBK1和p-IRF3蛋白的高表达（P < 0.05，P < 0.01），板蓝根含药血清各体积分数组的下调作用低于利巴韦林含药血清组，两者对IRF3 mRNA和蛋白均明显调控作用。结论： RSV能够诱导TLR3信号转导通路的激活从而促进IFN-β的表达，而板蓝根含药血清通过下调TLR3信号通路关键信号分子TLR3，TBK1，p-IRF3使IFN-β适度表达