血根碱通过调控PI3K/Akt信号通路诱导胰腺癌细胞凋亡的机制

目的：探讨血根碱对胰腺癌细胞凋亡的影响及其信号通路调控机制。方法：不同浓度血根碱（2，4，6 μmol·L-1）处理小鼠胰腺癌Panc02细胞不同时间（24，48，72 h）后，采用噻唑蓝（MTT）比色法检测血根碱对细胞生长抑制作用的影响；采用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶（Annexin V/PI）双染色试剂盒通过流式细胞仪检测血根碱对Panc02细胞凋亡影响；采用花青染料（JC-1）探针试剂盒荧光染料分析检测线粒体膜电位的变化；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2），Bcl-2相关X蛋白（Bax），总蛋白激酶B（Akt），磷酸化蛋白激酶B（p-Akt），总磷脂酰肌醇3激酶（PI3K），磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）的表达情况。结果：与空白组比较，不同浓度的血根碱作用同一时间后，随着药物浓度的增加细胞生长抑制率逐渐升高（P<0.05），与空白组比较，同一浓度作用不同时间后，随着时间的增加细胞生长抑制率逐渐升高（P<0.05）；与空白组比较，血根碱2 μmol·L-1组的细胞凋亡率明显升高，与空白组比较，血根碱4，6 μmol·L-1组的细胞凋亡率均明显升高（P<0.05）；与空白组比较，血根碱2 μmol·L-1组时红绿荧光变化，血根碱4，6 μmol·L-1组红色荧光减弱，绿色荧光增强，Panc02细胞线粒体膜电位降低；与空白组比较，血根碱2 μmol·L-1组处理的Bax，Bcl-2，p-PI3K，p-Akt，Akt和PI3K蛋白表达均变化，血根碱6 μmol·L-1组Bax蛋白表达增高，Bcl-2及PI3K/Akt信号通路中关键蛋白p-PI3K，p-Akt表达降低（P<0.05）。结论：血根碱通过抑制PI3K/Akt信号通路有效地诱导小鼠胰腺癌Panc02细胞经线粒体凋亡途径发生凋亡