化香树果序乙醇提取物调控RAS/MAPK通路对鼻咽癌细胞的影响

目的：研究化香树果序醇提物（ethanol extract of infructescence of Platycarya strobilacea，EPS）的对鼻咽癌CNE1，CNE2细胞的药理作用机制。方法：以鼻咽癌CNE1，CNE2细胞为研究对象，以EPS 0.25，0.5，1.0，1.5，2.0 g·L-1干预，设空白组，孵育24 h后，采用噻唑蓝（MTT）比色法检测EPS对CNE1，CNE2细胞活力的影响。用1.0 g·L-1 EPS处理CNE1，CNE2细胞24 h，倒置显微镜观察细胞形态变化，透射电镜观察细胞器的变化。流式细胞仪检测细胞凋亡程度，RNA高通量测序检测EPS处理后细胞中的差异基因。蛋白免疫印迹法检测HRas proto-oncogene （HRAS）蛋白细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）和c-Fos proto-oncogene （c-Fos）蛋白表达水平。结果：与空白组比较，EPS能明显抑制CNE1，CNE2细胞的增殖（P<0.05），且呈浓度依赖性。与空白组比较，EPS明显诱导CNE1，CNE2细胞质出现大量空泡，空泡相互融合，不断增大，最后细胞膜破裂，透射电镜发现细胞核没有发生明显的变化，溶酶体空泡化明显，流式结果未发现明显凋亡，与细胞methuosis死亡特征一致。高通量测序结果显示与癌蛋白（RAS）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路相关，与空白组比较HRAS，ERK1/2，c-Fos蛋白表达降低，磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）蛋白表达升高（P<0.05）。结论：EPS可通过调控RAS/MAPK信号通路诱导人鼻咽癌细胞CNE1，CNE2发生methuosis死亡，导致细胞相互融合，细胞内出现大量空泡