HPLC测定利格列汀的有关物质

目的 建立梯度洗脱高效液相色谱法测定利格列汀原料杂质的方法。方法 色谱柱为Agilent C18柱，流动相A为磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠2.0 g，加水1 000 mL溶解，并用磷酸调节pH值至2.5±0.1)，流动相B为甲醇-乙腈(55∶45)，以1.0 mL?min-1流速；检测波长为226 nm；柱温为30 ℃，进样量为10 μL。结果 8-[(3R)-哌啶-3-氨基]-7-(2-丁炔基)-3,7-二氢-3-甲基-1-[(4-甲基-2-喹唑啉基)甲基]-1H-嘌呤-2,6-二酮(杂质A)、8-[(3R)-3-氨基-1-哌啶基]-7-(3-溴-2-丁烯基)-3,7-二氢-3-甲基-1-[(4-甲基-2-喹唑啉基)甲基]-1H-嘌呤-2,6-二酮(杂质B)、8-[(3R)-3-甲酰胺基-1-哌啶基]-(7-(2-丁炔基)-3,7-二氢-3-甲基-1-[(4-甲基-2-喹唑啉基)甲基]-1H-嘌呤-2,6-二酮(杂质C)和利格列汀及其他未知杂质均能达到很好的分离，且杂质A、杂质B、杂质C与利格列汀分别在0.59~5.91 μg?mL-1(r=0.999 9)，0.59~5.86 μg?mL-1(r=0.999 8)、0.58~5.79 μg?mL-1(r=0.999?5)和1.32~13.22 μg?mL-1(r=0.999 7)内具有良好的线性关系。杂质A、杂质B、杂质C平均回收率(n=9)分别为99.12% (RSD=2.9%)、99.35%(RSD=2.4%)和98.52%(RSD=1.1%)。结论 本方法灵敏快速、准确、可靠，专属性强，可作为利格列汀的杂质检查