初级纤毛对蛇床子素促进成骨细胞成骨性分化的影响

目的 研究初级纤毛对蛇床子素促进成骨细胞成骨性分化的影响。方法 取新生SD大鼠颅骨，多次酶消化法获得成骨细胞，免疫荧光染色观察成骨细表面初级纤毛，RNA干扰法抑制鞭毛运输系统蛋白(IFT88)的表达，从而抑制成骨细胞初级纤毛的产生。以浓度为1×10-6 mol?L-1蛇床子素分别作用于RNA干扰成骨细胞，3，6 d后检测胞内碱性磷酸酶(ALP)活性；药物处理24 h后，Real-time PCR检测1型胶原(collagen 1，COL-1)、RUNX-2、ALP mRNA的表达量；Western blot检测COL-1、RUNX-2蛋白表达量。结果 超过70%的成骨细胞表面具有长度约为5 μm的初级纤毛，RNA干扰法显著抑制IFT88基因和蛋白的表达，并抑制了初级纤毛的发生。1×10-6 mol?L-1蛇床子素能够显著地促进胞内ALP的活性，成骨性分化相关的因子COL-1、RUNX-2和ALP基因的表达也相应增高，同时COL-1、RUNX-2蛋白表达量显著增加。当成骨细胞初级纤毛干扰后，药物促进ALP活性升高的作用消失，COL-1、Runx-2基因和蛋白的表达量也相应的降低。结论 成骨细胞初级纤毛的去除，能够显著性地抑制蛇床子素促进成骨细胞成骨性分化的能力