重组α-L-鼠李糖苷酶制备普鲁宁

目的 利用重组α-L-鼠李糖苷酶，以柚皮苷为底物，通过生物转化法制备普鲁宁。方法 以HPLC检测生物转化反应产物，通过DNS法对酶促反应过程进行动态分析，分析酶促反应动力学，优化普鲁宁制备工艺。结果 重组α-L-鼠李糖苷酶水解柚皮苷反应完全后，可得到反应产物普鲁宁和鼠李糖；生物转化法制备普鲁宁的最适反应温度为60 ℃、pH值为4.0、加酶量为12 U?mL-1、底物浓度为2.0 g?L-1，在此最优工艺条件下，94%的柚皮苷转化为普鲁宁；高浓度的Mn2+、Fe2+能够促进柚皮苷转化生成普鲁宁；重组酶对底物亲和力强，酶促反应的米氏常数Km为1.02 μmol?mL-1，Vmax为0.19 μmol?mL-1?min-1。结论 利用重组α-L-鼠李糖苷酶生物转化法制备普鲁宁，转化率高、重现性好、产物易于分离，可为普鲁宁功能研究、开发利用及改性等提供重要依据