UHPLC-MS/MS测定大鼠尿液中环磷酰胺及其代谢产物浓度

目的 基于UHPLC-MS/MS建立测定给予高剂量环磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）后大鼠尿液中CTX及其代谢产物脱氯乙基环磷酰胺（dechloroethylcyclophosphamide，DCCTX）、4-酮基环磷酰胺（4-Ketocyclophosphamide，4-KetoCTX）、羧基磷酰胺（carboxyphosphamide，CEPM）浓度的方法。方法 大鼠尿液样品经10%甲醇水溶液直接稀释，离心后取上清液，采用UHPLC-MS/MS进行检测分析。色谱柱：Agilent poroshell SB-C18（2.1 mm×75 mm，2.7 μm）；流动相：甲醇-10 mmol?L-1乙酸铵水溶液，进行梯度洗脱，流速0.25 mL?min-1，柱温25 ℃。采用电喷雾离子源，以多重反应监测模式进行正离子检测。用于定量检测分析的离子对分别为：CTX：m/z 261.10→140.10；DCCTX：m/z 199.20→78.00；4-KetoCTX：m/z 275.10→142.00；CEPM：m/z 293.10→221.10；替硝唑（tinidazole，TNZ）：m/z 248.10→121.10。结果 CTX及其代谢产物尿中浓度在40~2 000 ng?mL-1内线性关系良好（CTX、DCCTX、4-KetoCTX、CEPM的r2分别为：0.991 5，0.991 0，0.995 6，0.991 8），最低定量限均为40 ng?mL-1；日内、日间RSD分别为0.67%~12.76%，1.30%~11.92%；由内标归一化的基质因子计算RSD，结果为0.52%~7.60%；该方法的提取回收率为74.00%~102.70%（n=6），方法回收率为85.89%~110.69%（n=5）；测定成分和内标的稳定性均良好。结论 该方法快捷、准确可靠、重复性好，适用于大鼠高剂量CTX后CTX及其代谢产物尿药浓度的测定及排泄研究